Abstract:
3-Hydroxypropionic acid หรือ 3-Hydroxypropionate (3-HP) เป็นกรดอินทรีย์ที่ใช้ใน การผลิตสารเคมีและสารอนุพันธ์ ซึ่งนิยมใช้ในอุตสาหกรรมที่สำคัญ แต่วิธีการสังเคราะห์ผ่าน กระบวนเคมีของ 3-HP ได้ผลน้อย ไม่คุ้มต้นทุน และมีผลกระทบต่อสิ่งแวดล้อม ในงานวิจัยนี้จึงใช้ กระบวนการชีวสังเคราะห์ในการผลิต 3-HP ผ่านวิถี malonyl-CoA ใน Kamagatella pastoris ทีถูกก่อการกลายพันธุ์เฉพาะตำแหน่งของยีน malonyl-Coenzyme A reductase (mcr) ตำแหน่ง S1114K โดยมีการวิเคราะห์ codon usage ของยีน MCR สำหรับการแสดงออกใน K. pastoris จากนั้นสังเคราะห์ยีน mcr เพื่อการก่อการกลายพันธุ์เฉพาะตำแหน่งโดยอาศัยหลักการทำพีซีอาร์ แล้วจึงสังเคราะห์เวคเตอร์ที่ประกอบไปด้วยยีนกลายของ mcr เข้าสู่เซลล์เจ้าบ้าน K. pastoris และทดสอบความสามารถในการผลิต 3-HP ด้วย Gas Chromatography จากผลการทดลอง พบว่า การใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบเฉพาะร่วมกับการใช้ KOD Plus Mutagenesis Kit สามารถ สังเคราะห์การกลายที่สองตำแหน่งของการกลายที่อยู่ข้างกันได้สมบูรณ์ อัตราการเกิดการกลาย ถูกต้องหลังจากเข้าสู่เซลล์เจ้าบ้าน Escherichia coli แม่นยำตามตำแหน่งที่ความถูกต้องทุกลำดับ เบสนิวคลิโอไทด์ที่สังเคราะห์การกลายในส่วนการนำยีนกลาย mcr เข้าสู่ K. pastoris และการ ผลิต 3-HP จะมีการดำเนินการในอนาคต
