การก่อการกลายพันธุ์เฉพาะตำแหน่งของยีน Malonyl-Coenzyme A Reductase (MCR) เพื่อการผลิต 3 hydroxypropionate (MCR) ในยีสต์ Kamagatella pastoris ATCC 204164

พีระพรรณ คัมภิโร

dc.contributor.advisor	ชมภูนุช กลิ่นวงษ์
dc.contributor.author	พีระพรรณ คัมภิโร
dc.contributor.other	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์
dc.date.accessioned	2022-06-27T09:20:23Z
dc.date.available	2022-06-27T09:20:23Z
dc.date.issued	2563
dc.identifier.uri	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/78998
dc.description	โครงงานเป็นส่วนหนึ่งของการศึกษาตามหลักสูตรปริญญาวิทยาศาสตรบัณฑิต สาขาวิชาพันธุศาสตร์ คณะวิทยาศาสตร์ จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย ปีการศึกษา 2563	en_US
dc.description.abstract	3-Hydroxypropionic acid หรือ 3-Hydroxypropionate (3-HP) เป็นกรดอินทรีย์ที่ใช้ใน การผลิตสารเคมีและสารอนุพันธ์ ซึ่งนิยมใช้ในอุตสาหกรรมที่สำคัญ แต่วิธีการสังเคราะห์ผ่าน กระบวนเคมีของ 3-HP ได้ผลน้อย ไม่คุ้มต้นทุน และมีผลกระทบต่อสิ่งแวดล้อม ในงานวิจัยนี้จึงใช้ กระบวนการชีวสังเคราะห์ในการผลิต 3-HP ผ่านวิถี malonyl-CoA ใน Kamagatella pastoris ทีถูกก่อการกลายพันธุ์เฉพาะตำแหน่งของยีน malonyl-Coenzyme A reductase (mcr) ตำแหน่ง S1114K โดยมีการวิเคราะห์ codon usage ของยีน MCR สำหรับการแสดงออกใน K. pastoris จากนั้นสังเคราะห์ยีน mcr เพื่อการก่อการกลายพันธุ์เฉพาะตำแหน่งโดยอาศัยหลักการทำพีซีอาร์ แล้วจึงสังเคราะห์เวคเตอร์ที่ประกอบไปด้วยยีนกลายของ mcr เข้าสู่เซลล์เจ้าบ้าน K. pastoris และทดสอบความสามารถในการผลิต 3-HP ด้วย Gas Chromatography จากผลการทดลอง พบว่า การใช้ไพรเมอร์ที่ออกแบบเฉพาะร่วมกับการใช้ KOD Plus Mutagenesis Kit สามารถ สังเคราะห์การกลายที่สองตำแหน่งของการกลายที่อยู่ข้างกันได้สมบูรณ์ อัตราการเกิดการกลาย ถูกต้องหลังจากเข้าสู่เซลล์เจ้าบ้าน Escherichia coli แม่นยำตามตำแหน่งที่ความถูกต้องทุกลำดับ เบสนิวคลิโอไทด์ที่สังเคราะห์การกลายในส่วนการนำยีนกลาย mcr เข้าสู่ K. pastoris และการ ผลิต 3-HP จะมีการดำเนินการในอนาคต	en_US
dc.description.abstractalternative	3-Hydroxypropionic acid or 3-Hydroxypropionate (3-HP) is an organic acid used in the manufacture of chemicals and derivatives which is commonly used in important industries. The 3-HP chemical synthesis method is low yield, not cost-effective, and impacts the environment. In this study, biosynthesis was used to produce 3-HP via the malonyl-CoA pathway by inducing site-directed mutation on malonyl Coenzyme A reductase (mcr) gene that affected production 3-hydroxypropionate (3-HP) in Kamagatella pastoris. The codon usage of mcr gene for expression in K. pastoris was synthesized for location-specific mutation S1114K based on PCR principles. The vector containing the mcr gene will be transformed into the host cell K. pastoris and investigated for 3-HP production by Gas Chromatography. From the results of the experiment, it was found that using a specially designed primer in conjunction with the use of the KOD Plus Mutagenesis Kit shown the two positions of the adjacent mutagenesis, can be completely synthesized. Correct incidence after entering the host cell Escherichia coli was precisely positioned at the correctness of all nucleotide sequences that were synthesized. However, transformed K. pastoris with mcr mutant gene and 3-HP production analysis will be performed in the future.	en_US
dc.language.iso	th	en_US
dc.publisher	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en_US
dc.rights	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en_US
dc.subject	กรดอินทรีย์ -- การสังเคราะห์	en_US
dc.subject	จุลินทรีย์ -- การกลายพันธุ์	en_US
dc.subject	Organic acids -- Synthesis	en_US
dc.subject	Microbial mutation	en_US
dc.title	การก่อการกลายพันธุ์เฉพาะตำแหน่งของยีน Malonyl-Coenzyme A Reductase (MCR) เพื่อการผลิต 3 hydroxypropionate (MCR) ในยีสต์ Kamagatella pastoris ATCC 204164	en_US
dc.title.alternative	Site-directed mutagenesis of Malonyl-Coenzyme A Reductase (MCR) gene to produce 3-hydroxypropionate (3-HP) in Kamagatella pastoris ATCC 204164	en_US
dc.type	Senior Project	en_US
dc.degree.grantor	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en_US