Abstract:
วิถีสัญญาณ Notch เป็นวิถีสัญญาณภายในเซลล์ที่มีในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยน้ำนมซึ่งทำหน้าที่เกี่ยวข้องกับการเปลี่ยนแปลงของเซลล์ การเพิ่มจำนวน และการตายของเซลล์ ความผิดปกติของการส่งวิถีสัญญาณ Notch นำไปสู่การเกิดมะเร็งหลายชนิด โดยพบการกลายพันธุ์ของยีนที่แสดงออกโปรตีน NOTCH1 มากกว่า 50% ในผู้ป่วยมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิด T cell (T cell acute lymphoblastic leukemia; T-ALL) โดยเฉพาะอย่างยิ่งการกลายพันธุ์ของยีนแสดงออกโปรตีน HD พบมากกว่า 40% ของผู้ป่วยโรคมะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิด T cell ซึ่งส่งผลให้วิถีสัญญาณ Notch เพิ่มขึ้นอย่างมาก หนึ่งในวิธียับยั้งวิถีสัญญาณ Notch ที่เพิ่มขึ้นอย่างมากนี้คือการใช้ gamma secretase inhibitor (GSI) อย่างไรก็ตามการใช้ GSI ก็ยังมีข้อเสียคือการมีสับสเตรทหลายชนิด (pan-inhibitor activity) เช่น APP ERBBP4 E-cadherin ephrinB2 และ CD44 เป็นต้น จึงเป็นสาเหตุที่การรักษาด้วย GSI ผลข้างเคียงตามมา การใช้รีคอมบิแนนท์แอนติบอดี scFv-Fc ที่มีความจำเพาะอย่างมากต่อ negative regulatory region (NRR) ของ NOTCH1 และ NOTCH2 (αN1 scFv-Fc และ αN2 scFv-Fc) จึงเป็นทางเลือกที่มีความหวังในการรักษาโรค T-ALL ที่เกิดจากการกลายพันธุ์ที่ยีน NOTCH การศึกษานี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อผลิตรีคอมบิแนนท์แอนติบอดีทั้ง 2 ชนิดจากเซลล์ไลน์ CHO-K1 เพื่อทดสอบประสิทธิภาพการรักษาในเซลล์ไลน์มะเร็งเม็ดเลือดขาวชนิด T cell ประกอบไปด้วยเซลล์ไลน์ Molt4 และ Jurkat ผลพบว่าเซลล์ไลน์ CHO-K1 ที่ผลิต αN1 scFv-Fc and αN2 scFv-Fc มีผลิตภาพจำเพาะ 16.20 และ 28.96 พิโคกรัมต่อเซลล์ต่อวัน ภายใน 7 วันของการผลิตตามลำดับ ผลิตภัณฑ์ที่ผ่านการทำให้บริสุทธิ์ด้วยวิธีการคอลัมน์ โครมาโทกราฟีสัมพรรคภาพถูกตรวจสอบด้วย SDS-PAGE และ Western Blot นอกจากนี้ Molt4 และ Jurkat ยังตรวจพบการแสดงออกของ NOTCH1 และ NOTCH2 ซึ่งบ่งบอกถึงการส่งวิถีสัญญาณ Notch ภายในเซลล์ การทดลองที่ควรทำเพิ่มเติมคือการลดระดับของวิถีสัญญาณ Notch การลดความเป็นเซลล์มะเร็งต้นกำเนิด (cancer stemness) และการตายของเซลล์ในเซลล์ไลน์ Molt4 และ Jurkat จากการให้ αN1 scFv-Fc และ αN2 scFv-Fc จำเป็นต้องถูกศึกษาในอนาคต การศึกษานี้แสดงให้เห็นว่ารีคอมบิแนนท์แอนติบอดีสามารถในไปใช้ในการยังยั้งวิถีสัญญาณ Notch ในเซลล์ไลน์มะเร็งเม็ดเลือดขาวได้อย่างมีประสิทธิภาพ และเป็นทางเลือกหนึ่งสำหรับการใช้ภูมิคุ้มกันบำบัดในการรักษารโรค T-ALL
