โครงการ การแยกเซลล์ต้นกำเนิดจากสายสะดือเพื่อสร้าง humanized mice เพื่อใช้ในการทดสอบวัคซีนเอดส์ในระดับก่อนการทดสอบในมนุษย์ : รายงานการวิจัยฉบับสมบูรณ์

สุณี ศิริวิชยกุล; เอกชัย พรหมเพชร; ภัทรวัจน์ ตันติวรสิทธิ์; นิธิรา อนัคกุล; เกียรติ รักษ์รุ่งธรรม

dc.contributor.author	สุณี ศิริวิชยกุล
dc.contributor.author	เอกชัย พรหมเพชร
dc.contributor.author	ภัทรวัจน์ ตันติวรสิทธิ์
dc.contributor.author	นิธิรา อนัคกุล
dc.contributor.author	เกียรติ รักษ์รุ่งธรรม
dc.contributor.other	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะแพทยศาสตร์
dc.date.accessioned	2022-10-21T09:59:25Z
dc.date.available	2022-10-21T09:59:25Z
dc.date.issued	2559
dc.identifier.uri	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/80676
dc.description.abstract	ในความพยายามที่จะหาสัตว์ทดลองที่จะใช้ทดสอบวัคซีนเพื่อให้ได้ผลการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันที่ใกล้เคียงกับคนที่สุดนั้น humanized mice model เป็นทางเลือกที่สามารถให้การตอบสนองทางภูมิคุ้มกันที่ใกล้เคียงกับการตอบสนองในคนมากที่สุด กล่าวคือ humanized mice เป็นหนูทดลองที่ได้รับการปลูกถ่ายเซลล์ต้นกำเนิดของคน (C034+ human hematopoietic stem cells) ที่แยกได้จากเลือดที่เจาะจากสายสะดือทารกแรกคลอด เพื่อให้เซลล์ต้นกำเนิดของคนไปเจริญเติบโตเป็นเซลล์ที่รับผิดชอบต่อการตอบสนองทางภูมิคุ้มกัน เช่น lymphocytes และ macrophages ในหนู โดยถือว่าการปลูกถ่ายเซลล์ต้นกำเนิดประสบความสำเร็จ ต่อเมื่อสามารถตรวจพบเซลล์ที่เกี่ยวกับระบบภูมิคุ้มกันของคนได้มากกว่า 20% เมื่อเจาะเลือดหนูมาตรวจ จากการปลูกถ่ายเซลล์ต้นกำเนิด 200,000 เซลล์แก่ลูกหนูแรกคลอดอายุระหว่าง 3-5 วัน จำนวน 57 ตัว พบว่ามีลูกหนูเพียง 13/57 (22.8%) ที่มีเซลล์ภูมิคุ้มกันของคนอยู่มากกว่า 20% แต่มีเพียง 8 ตัวที่รอดชีวิตอยู่จนสามารถนำมาทดสอบวัคซีนได้ โดยมีค่าเฉลี่ยเซลล์ภูมิคุ้มกันของคนอยู่ที่ 56.7% (24.5), range 22.9-89.2% ก่อนที่จะมีการฉีดวัคซีน หนู 6 ตัวได้รับ Asian mosaic HIV DNA vaccine โดยการฉีดเข้ากล้ามและตามด้วยการกระตุ้นด้วยไฟฟ้า (electroporator) ในปริมาณ 100 ไมโครกรัม 3 ครั้ง แต่ละครั้งห่างกัน 2 สัปดาห์ และทำการประเมินการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันหลังจากฉีดเข็มที่ 3 ครบ 1 สัปดาห์ ในขณะที่หนูอีก 2 ตัวเป็น negative control ซึ่งถูกฉีดด้วย plasmid vector (pCMVKan) การศึกษานี้ตรวจการตอบสนองทางด้านแอนติบอดีด้วยวิธี western blot เพื่อดูว่าหนูมีการสร้าง anti-gp41, anti-gp120 หรือ anti-gp160 หรือไม่ ซึ่งผลของการทดลอง พบว่าหนูไม่มีการสร้างแอนติบอดีดังกล่าวเลย คณะผู้วิจัยตรวจการตอบสนองทางด้านเซลล์ด้วยวิธี ELISpot โดยกระตุ้นเซลล์ด้วย pooled peptides ของ HIV-1 CRF01_AE และ HIV-1 B พบว่ามีหนู 1 ตัว ที่มีการตอบสนองต่อการกระตุ้นด้วย HIV-1 CRF01 AE ที่ 90.7 SPC (spot forming cells)/10⁶ splenocytes และตอบสนองต่อการกระตุ้นด้วย HIV-1 B pooled peptides ที่ 153.3 SPC/10⁶ splenocytes และหนู 1 ตัว มีเพียงการตอบสนองต่อการกระตุ้นด้วย HIV-1 B pooled peptides ที่ 85.3 SPC/10⁶ splenocytes โดยที่ไม่มีการตอบสนองต่อการกระตุ้นด้วย HIV-l CRF01 AE pooled peptides ผลการศึกษาแสดงว่า humanized mice model นี้สามารถนำมาใช้ทดสอบการตอบสนองทางภูมิคุ้มกันต่อวัคซีนในระดับ pre-clinical ได้ แต่ขบวนการผลิต humanized mice จะต้องได้รับการพัฒนาให้มีประสิทธิภาพมากกว่านี้	en_US
dc.description.abstractalternative	Humanized mouse model is an alternative attempt to find a suitable animal model for vaccine testing that closely mimics the immune response in human. Humanized mice are engrafted with C034+ human hematopoietic stem cells (HSCs) isolated from human cord blood. HSCs will then proliferate and differentiate to immune cells, i.e., lymphocytes and macrophage in mice. The engraftment is considered successful if higher than 20% human immune cells are detected in mice. Thirteen out of fifty-seven (22.8%) 3-5 day old new born mice were successfully engrafted with 200,000 HSCs but only 8 survived long enough to allow for HIV DNA vaccine testing. Mean and standard deviation (SO) of engrafted cells were 56.7% (24.5) with range from 22.9-89.2% before vaccination. Among these 8 mice, 6 were immunized intramuscularly followed by electroporation with 100 ug Asian mosaic HIV envelope DNA vaccine (mosaic 1-3) 3 times, once every 2 weeks. The other 2 mice served as negative controls, being immunized with plasmid vector (pCMVkan). All mice were sacrificed 1 week after the last immunization. For humoral immune response, none of the mice produced anti-gp41, anti-gp120 or anti-gp160 as determined by Western blot. ELiSpot assay was used to measure cell-mediated immune response. One mouse responded to both HIV-1 CRF01_AE and HIV-1 B stimulation at 90.7 SPC (spot forming units)/10⁶ splenocytes and 153.3 SFU/10⁶ splenocytes, respectively. Another mouse responded to only HIV-1 B stimulation at 85.3 SFU/10⁶ splenocytes without any response to HIV-l CRF01_AE stimulation. Our study indicates that humanized mouse model can be used in pre-clinical testing of vaccine intended for human use. However, method of producing humanized mice needs to be improved further.	en_US
dc.description.sponsorship	ได้รับทุนอุดหนุนการวิจัยจากงบประมาณแผ่นดิน ประจำปีงบประมาณ 2558	en_US
dc.language.iso	th	en_US
dc.publisher	คณะแพทยศาสตร์ จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en_US
dc.rights	คณะแพทยศาสตร์ จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en_US
dc.subject	สเต็มเซลล์	en_US
dc.subject	วัคซีนโรคเอดส์	en_US
dc.title	โครงการ การแยกเซลล์ต้นกำเนิดจากสายสะดือเพื่อสร้าง humanized mice เพื่อใช้ในการทดสอบวัคซีนเอดส์ในระดับก่อนการทดสอบในมนุษย์ : รายงานการวิจัยฉบับสมบูรณ์	en_US
dc.title.alternative	Isolation of human hematopoietic stem cells from cord blood to construct humanized mice for HIV vaccine in Pre-clinical testing	en_US
dc.type	Technical Report	en_US