Abstract:
ได้โคลน cDNA ของ Major Jelly Protein ของผึ้งโพรง Apis cerana (AcMRJP) โดยใช้ผลิตภัณฑ์จาก TR-PCR หลังศึกษาสมบัติเฉพาะพบว่าได้โคลนของ MRJP1 และ MRJP2 โดย Open Reading Frames (ORF) ของ AcMPJP1 และ MRJP2 มีขนาด 1302 และ 1392 นิวคลีโอไทด์ ซึ่งระบุการถอดรหัสเป็นกรดอะมิโน 433 และ 463 residues ตามลำดับ ความคล้ายคลึงของ MRCJP1 และ MRCJP2 ระหว่างผึ้งโพรงและผึ้งพันธุ์ (Apis mellifera) เป็น 93 และ 92 เปอร์เซ็นต์ สำหรับลำดับนิวคลีโอไทด์ และเป็น 90 และ 85 เปอร์เซ็นต์ สำหรับกรดอะมิโนตามลำดับ เมื่อ subclone cDNA ของ AcMRJP1 โดยใช้ expression vector, pET17b และทรานสฟอร์มเข้าสู่ E. coli Rosetta (DE3) pLys S พบการแสดงออกเพื่อผลิตโปรตีน AcMRJP1 ในรูปไม่ละลายน้ำมีขนาด 47.9 kDa การวิเคราะห์โดยใช้ Western blot แสดงว่ามีการแสดงออกให้ AcMRJP1 ใน E. coli ได้ การแสดงออกพบหลังจากชักนำด้วย IPTG เป็นเวลา 1 ชั่วโมง และระดับการแสดงออกสูงสุดคงที่หลังชักนำได้ 4 ชั่วโมง การเลี้ยงเชื้อในอาหารเหลวในจำนวน 1 ลิตร จะให้ผลิตผลโปรตีน AcMRJP1 ประมาณ 20 มิลลิกรัม
Description:
PCR product length cDNA ของผึ้งโพรง -- ลำดับนิวคลีโอไทด์และลำดับกรดอะมิโนของ AcMRJP1, AcMRJP2 -- PRC product ที่ได้จากการสังเคราะห์ full length MRJPAcDNA ของผึ้งโพรง -- โปรตีนที่ได้จากการด้วย SDS-PAGE -- โปรตีนที่ได้จากการแยกสกัดให้บริสุทธิ์ด้วย aFFinity column และแยกขนาดด้วย SDS-PACE -- โปรตีนที่ติดตามผลด้วย Western blot -- Cloning, expression and genomic organization of genes encoding major royal jelly protein 1 and 2 of the honey bee (Apis cerana) / Champrapa Imjongjirak, Sirawut Klinbunga, Siripron Sittipraneed
