การสร้าง E.Coli ที่สามารถผลิตโปรตีนหลักรอยัลเจลลี ของผึ้งด้วยการโคลนดีเอ็นเอ : รายงานผลการวิจัย

ศิริพร สิทธิประณีต

dc.contributor.author	ศิริพร สิทธิประณีต
dc.contributor.other	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์
dc.date.accessioned	2008-10-03T09:33:57Z
dc.date.available	2008-10-03T09:33:57Z
dc.date.issued	2547
dc.identifier.uri	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/8216
dc.description	PCR product length cDNA ของผึ้งโพรง -- ลำดับนิวคลีโอไทด์และลำดับกรดอะมิโนของ AcMRJP1, AcMRJP2 -- PRC product ที่ได้จากการสังเคราะห์ full length MRJPAcDNA ของผึ้งโพรง -- โปรตีนที่ได้จากการด้วย SDS-PAGE -- โปรตีนที่ได้จากการแยกสกัดให้บริสุทธิ์ด้วย aFFinity column และแยกขนาดด้วย SDS-PACE -- โปรตีนที่ติดตามผลด้วย Western blot -- Cloning, expression and genomic organization of genes encoding major royal jelly protein 1 and 2 of the honey bee (Apis cerana) / Champrapa Imjongjirak, Sirawut Klinbunga, Siripron Sittipraneed	en
dc.description.abstract	ได้โคลน cDNA ของ Major Jelly Protein ของผึ้งโพรง Apis cerana (AcMRJP) โดยใช้ผลิตภัณฑ์จาก TR-PCR หลังศึกษาสมบัติเฉพาะพบว่าได้โคลนของ MRJP1 และ MRJP2 โดย Open Reading Frames (ORF) ของ AcMPJP1 และ MRJP2 มีขนาด 1302 และ 1392 นิวคลีโอไทด์ ซึ่งระบุการถอดรหัสเป็นกรดอะมิโน 433 และ 463 residues ตามลำดับ ความคล้ายคลึงของ MRCJP1 และ MRCJP2 ระหว่างผึ้งโพรงและผึ้งพันธุ์ (Apis mellifera) เป็น 93 และ 92 เปอร์เซ็นต์ สำหรับลำดับนิวคลีโอไทด์ และเป็น 90 และ 85 เปอร์เซ็นต์ สำหรับกรดอะมิโนตามลำดับ เมื่อ subclone cDNA ของ AcMRJP1 โดยใช้ expression vector, pET17b และทรานสฟอร์มเข้าสู่ E. coli Rosetta (DE3) pLys S พบการแสดงออกเพื่อผลิตโปรตีน AcMRJP1 ในรูปไม่ละลายน้ำมีขนาด 47.9 kDa การวิเคราะห์โดยใช้ Western blot แสดงว่ามีการแสดงออกให้ AcMRJP1 ใน E. coli ได้ การแสดงออกพบหลังจากชักนำด้วย IPTG เป็นเวลา 1 ชั่วโมง และระดับการแสดงออกสูงสุดคงที่หลังชักนำได้ 4 ชั่วโมง การเลี้ยงเชื้อในอาหารเหลวในจำนวน 1 ลิตร จะให้ผลิตผลโปรตีน AcMRJP1 ประมาณ 20 มิลลิกรัม	en
dc.description.abstractalternative	Major Royal Jelly Proteins cDNA of Apis cerana (AcMRJPcDNA) were cloned and characterized. The Open Reading Frames (ORF) of AcMRJP1 and AcMRJP2 were 1302 and 1392 nucleotides encoding 433 and 463 amino acid residues, respectively. The similarity of AcMRJP1 and MRJP2 and their homologues in Apis mellifera were 93 and 92% for nucleotide whereas 90 and 86% for deduced amino acid. The complementary DNA of AcMRJP1 was subcloned into expression vector, pET17b, and transformed into E. coli Rosetta (DE3) pLys S. Recombinant AcMRJP1 47.9 kDa was expressed as inclusion bodies. Western blot analysis revealed successful expression of recombinant AcMRJP1 after 1 hour of IPTG induction and reached saturation level aster 4 hours. The yield of purified AcMRJP1 was approximately 20 mg protein per litre of liquid culture.	en
dc.description.sponsorship	ทุนวิจัยกองทุนรัชดาภิเษกสมโภช	en
dc.format.extent	4808309 bytes
dc.format.mimetype	application/pdf
dc.language.iso	th	es
dc.publisher	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en
dc.rights	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย	en
dc.subject	ผลิตภัณฑ์ผึ้ง	en
dc.subject	นมผึ้ง	en
dc.subject	ผึ้งโพรง	en
dc.title	การสร้าง E.Coli ที่สามารถผลิตโปรตีนหลักรอยัลเจลลี ของผึ้งด้วยการโคลนดีเอ็นเอ : รายงานผลการวิจัย	en
dc.type	Technical Report	es
dc.email.author	ssiriporn@netserv.chula.ac.th