การแยกโปรตีนจากเศษหนังฟอกโครมด้วยแอลคาไลน์โปรติเอสที่ใช้เป็นอาหารปลา

Abstract

Bacillus subtilis TISTR 25 สามารถผลิตแอลคาไลน์โปรตีเอสได้ในปริมาณสูงเมื่อเลี้ยงในขวดเขย่า โดยใช้สูตรอาหารที่ประกอบด้วย KH2PO40.1% (w/v). MgSO4.7H2O 0.05% (w/v), CaCI2.2H2O 0.001% (w/v) กลูโคส 0.5% (w/v) และที่มี yeast extract 0.3% ไนโตรเจน ค่าความเป็นกรด-ด่างของอาหารเลี้ยงเชื้อเป็น 7.0 อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ความเร็วรอบ 250 rpm เชื้อสามารถผลิตเอนไซม์ได้สูงสุดเท่ากับ 14.64 ยูนิตต่อมิลลิลิตร ในชั่วโมงที่ 36 สภาวะที่เหมาะสมในการสกัดโปรตีนจากเศษฟอกหนังโครมใช้แอลคาไลน์โปรติเอสที่ผลิตโดยเชื้อ Bacillus subtilis TISTR 25 คือ ต้มเศษหนังที่อุณหภูมิ 71 °C โดยเติมแคลเซียมไฮดรอกไซต์ 6.5% (w/v) เพื่อปรับให้มี pH 10.5 เวลาที่เหมาะสมในการย่อย คือ 3 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 45 °C และปริมาณแอคติวิตีของแอลคาไลน์โปรติเอสที่ใช้ คือ 10 ยูนิต ต่อน้ำหนักหนัง 2.5 กรัม น้ำที่เหมาะสมในการทดลองในการต้มหนัง คือ น้ำประปา ปริมาณ 15 เท่าของน้ำหนักหนัง วิธีการที่เหมาะสมในการทำให้สารละลายโปรตีนไฮโดรไลเสตแห้งคือ การอบแห้ง ไม่พบเชื้อที่ทำให้เกิดโรค ปากและเท้าเปื่อย, แอนแทรกซ์ และไม่พบ Salmonella sp., Shigella sp. และ E. coli ในเศษหนังฟอกโครมและโปรตีนผงแห้ง เมื่อนำโปรตีนไฮโดรไลเสตไปแทนที่ปลาป่นในอาหารปลาดุกลูกผสมในระดับ 0%, 25%, 50% และ 70% (w/w) พบว่าหลังจากนำอาหาร 4 สูตรนี้ไปเลี้ยงปลาดุกลูกผสมขนาดเริ่มต้น 40 กรัม ได้ผลการทดลอง คือ น้ำหนักปลาที่เพิ่มขึ้น (กรัม) อัตราการเจริญเติบโตจำเพาะ (ร้อยละต่อวัน) อัตราการรอด และอัตราแลกเนื้อ มีค่าทางสถิติไม่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญ (p > 0.05) โดยระดับโปรตีนที่เหมาะสมในการแทนที่ปลาป่นอยู่ในช่วง 25-50% (w/w)