การตรวจหาชนิดของแปปปิโลมาไวรัสในมะเร็งปากมดลูกระยะลุกลาม โดยใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสและไฮบริไดเซชั่น

Abstract

Hunan papillomavirus (HPV) เป็นสาเหตุของโรคหูดหงอนไก่ (condyloma acumintat) ซึ่งเป็นโรคหนึ่งของโรคติดต่อทางเพศสัมพันธ์พบได้ทั่วโลก นอกจากโรคหูดหงอนไก่แล้วโรคเนื้องอกของชั้นเยื่อบุผิวของปากมดลูก (cervical intraepithelial neoplasia: CIN) และโรคมะเร็งปากมดลูก (cervical cancer) ก็มีแนวโน้มว่า จะเป็นผลมาจากการติดเชื้อ HPV โดยเฉพาะ HPVs ในกลุ่มความเสี่ยงสูง ทำให้มีสมมุติฐานว่า HPV อาจมีบทบาทในการเปลี่ยนแปลงเซลล์ติดเชื้อให้พัฒนากลายเป็นเซลล์มะเร็งได้ วิทยานิพนธ์นี้ได้ทำการศึกษาตัวอย่างเนื้อเยื่อซึ่งถูกตรึงด้วยฟอร์มาลินและเก็บฝังในพาราฟิน (formalin-fixed, paraffin embedded tissue) และได้พิสูจน์ทางพยาธิวิทยาว่า เป็นมะเร็งปากมดลูกระยะลุกลาม เพื่อตรวจหา HPV-DNA ตัวอย่างทั้งหมด 100 ตัวอย่างถูกนำมาสกัดแยก DNA และทำการตรวจ ขยายเพิ่มจำนวนโดยวิธี polymerase chain reaction (PCR) โดยใช้ L1 consensus primers ซึ่งจำเพาะต่อ HPV ผลผลิตที่ได้จากกระบวนการ PCR จะถูกนำมาตรวจวิเคราะห์โดยวิธี gel electrophoresis (GE) และ dot hybridization (DH) ซึ่งใช้ตัวตรวจจับทั่วไป (generic oligonucleotide probe : GP) และ ตัวตรวจจับจำเพาะ (type specific oligonucleotide probe :TS) ในการทดสอบนี้ใช้ TS จำเพาะต่อ HPV จำนวน 5 types คือ TS-6, TS-16, TS-18, และ TS-33 ตัวตรวจจับทั้งหมดจะถูกติดฉลากด้วยสารปลอดกัมมันตภาพรังสี (non-isotopic labelled probes) การตรวจผลผลิตจากกระบวนการ PCR โดยวิธี DH นี้สามารถเพิ่มความไวในการตรวจหา HPV-DNA อย่างน้อย 10 เท่า ผลการตรวจสอบพบว่า สามารถตรวจพบ HPV-DNA ในตัวอย่างจำนวน 82 ตัวอย่างคิดเป็นร้อยละ 82 และพบว่า HPV-16 เป็น type ที่พบมากที่สุดคือ 35 จาก 82 ตัวอย่าคิดเป็นร้อยละ 42.7 ตามด้วย HPV – 18 (17/82) ร้อยละ 20.7 และ HPV-33 (3/82) ร้อยละ 3.6 มี 5 ตัวอย่าง (ร้อยละ 6.1) ที่ตรวจพบทั้ง HPV-16 และ 18 อยู่ด้วยกัน ในงานวิจัยนี้ไม่สามารถตรวจพบว่ามี HPV - 6 และ 11 ในตัวอย่างเนื้อเยื่อที่นำมาศึกษา ผลการทดลองทั้งหมดนี้แสดงให้เห็นว่า การติดเชื้อ HPV โดยเฉพาะ HPV-16 และ 18 เป็นปัจจัยรวมสำคัญปัจจัยหนึ่งของโรคมะเร็งปากมดลูกระยะลุกลาม