การตรวจสอบอัลลีลของยีน ที่สร้างโปรตีนบนผิวเมอร์โรซอยต์ (MSP1)ของ Plasmodium Falciparum อย่างรวดเร็วโดยพอลิเมอเรสเชนรีแอ็กชัน และการวิเคราะห์โดยเอนโดนิวคลีเอสชนิดตัดจำเพาะ

Abstract

โปรตีนบนผิวเมอร์โรซอยต์ของ พลาสโมเดียม ฟาลซิปารั่ม (MSP1) เป็นโปรตีนที่มีศักยภาพในการผลิตวัคซีนป้องกันมาลาเรียสำหรับระยะที่เชื้อเจริญในเม็ดเลือดแดงโดยไม่ใช้เพศ โปรตีนชนิดนี้มีความหลากหลายของแอนติเจนระหว่างไอโซเลตมาก ดังนั้น MSP1 จึงสามารถใช้เป็นตัวแยกความแตกต่างระหว่างไอโซเลตของมาลาเรียที่น่าสนใจชนิดหนึ่ง อย่างไรก็ตามวิธีการตรวจสอบจีโนไทป์ของ MSP1 ทั้งโมเลกุลถูกจำกัดโดยยีนที่มีขนาดใหญ่และปรากฏเป็น 2 รูปแบบ (dimorphic) โดยสามารถเกิดการแลกเปลี่ยนสารพันธุกรรมภายในยีนจึงเกิดอัลลีลที่ต่างกัน การศึกษานี้ได้พัฒนาวิธีการตรวจสอบจีโนไทป์ของ MSP1 อย่างรวดเร็วโดยอาศัยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสเพื่อเพิ่มปริมาณของดีเอ็นเอในส่วนของยีนตั้งแต่ block 1 ถึง 5 block 5 ถึง 13 และ block 12 ถึง 17 แล้วตัดด้วยเอ็นไซม์ตัดจำเพาะภายใน ดังนั้นสามารถแยกอัลลีล K1 และ RO33 ในส่วนของ block 2 โดยตำแหน่งตัดจำเพราะของ AluI และ PstI ในบริเวณดังกล่าวตามลำดับ นอกจากนี้ในส่วนของ block 4 สามารถแยกอัลลีล K1 และ MAD20 ได้โดยย่อยดัวยเอ็นไซม์ HaeIII สำหรับผลิตผล PCR ตั้งแต่ block 5 ถึง 13 และ block 12 ถึง 17 สามารถแยกชนิดของอัลลีลโดยการย่อยดัวยเอ็นไซม์ Dral และ HindIII ตามลำดับ เมื่อทำการตรวจสอบความถูกต้องของวิธีดังกล่าวโดยใช้ไอโซเลตที่ทราบอัลลีลจำนวน 15 ไอโซเลต และ 1 สายพันธุ์ และไม่ทราบอัลลีล 10 ไอโซเลต และ 4 สายพันธุ์ โดยเปรียบเทียบกับวิธี Southem blot hybridization โดยใช้ probe ที่มีความจำเพาะต่ออัลลีลพบว่าให้ผลสอดคล้องกัน นอกจากนี้การตรวจสอบจีโนไทป์ด้วยวิธีนี้สามารถตรวจพบการปะปนของเชื้อที่มีอัลลีล MSPI ต่างกันใน 8 ไอโซเลต โดยมีขีดจำกัดของการตรวจเมื่อเชื้อมีจำนวนไม่ต่ำกว่า 4 ตัว ดังนั้นวิธีดังกล่าวสามารถตรวจสอบจีโนไทป์ของ MSP1 ได้ทั้งอัลลีล และน่าจะใช้ศึกษาลักษณะที่ต่างกัน ในกลุ่มประชากรของ P. faloiparum