การผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีของพลาสโมเดียม ฟัลซิปารัม ระยะที่อยู่ในเม็ดเลือดแดง

Abstract

การผลิตโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อเชื้อ พลาสโมเดียม ฟัลซิปารัม ระยะที่อยู่ในเม็ดเลือดแดงโดยทำการเชื่อมเซลล์ NS-1 ซึ่งเป็นเซลล์ myeloma กับเซลล์ม้ามของหนู Balb/c ที่ถูกกระตุ้นภูมิคุ้มกัน จากการเชื่อมเซลล์ 8 ครั้งได้เซลล์ลูกผสมทั้งหมดจำนวน 1024 หลุมของจานเพาะเลี้ยงเซลล์ และมีอยู่ 177 หลุม (17.5%) ที่หลั่งแอนติบอดีที่มีความจำเพาะกับเชื้อมาลาเรียและได้คัดเลือกมา 13 หลุมเพื่อทำ single cell cloning ได้ monoclone ทั้งหมด 58 monoclone สามารถจำแนกโมโนโคลนอลแอนติบอดีตามรูปแบบการติดสีสารเรืองแสงได้เป็น 6 กลุ่ม ดังนี้ คือ กลุ่มที่ 1 ทำปฏิกิริยากับ rhoptry organelle ของเชื้อมาลาเรียระยะ schizont และ merozoite กลุ่มที่ 2 ทำปฏิกิริยาเรืองแสงเข้มที่บริเวณผิวเซลล์ของ schizont และ merozite ที่อยู่ภายในเซลล์ schizont การติดสีสารเรืองแสงของกลุ่มนี้มีลักษณะคล้ายพวงองุ่น กลุ่มที่ 3 ทำปฏิกิริยาเรืองแสงเป็นจุดเล็กๆ บริเวณเยื่อหุ้มเซลล์เม็ดเลือดแดงที่ติดเชื้อ กลุ่มที่ 4 ติดสีสารเรืองแสงที่บริเวณไซโตปลาสซึมของเชื้อทุกระยะการเจริญในเม็ดเลือดแดงรวมทั้งระยะ gametocyte กลุ่มที่ 5 ทำปฏิกิริยาเรืองแสงที่เยื้อหุ้ม parasitophorous vacuole ของเชื้อ และกลุ่มที่ 6 นั้นจะทำปฏิกิริยาเรืองแสงบริเวณไซโตปลาสซึมและผิวเซลล์ของเชื้อทุกระยะการเจริญรวมทั้งระยะ gametocyte เมื่อนำโมโนโคลนอลแอนติบอดีกลุ่มที่ 2-6 มาใช้ศึกษาความหลากหลายของแอนติเจนของเชื้อมาลาเรีย พลาสโมเดียม ฟัลซิปารัม 18 ไอโซเลตที่ได้จากผู้ป่วยในประเทศไทยที่อยู่ในพื้นที่ที่มีการระบาดของโรค สามารถจำแนกไอโซเลตของเชื้อมาลาเรียดังกล่าวออกเป็นไทพ์ต่างๆ ได้ 10 ไทพ์