1. CUIR at Chulalongkorn University
  2. Faculty and Institute
  3. Graduate School - Grad
  4. Grad - Theses
Please use this identifier to cite or link to this item: https://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/70885
Full metadata record
DC FieldValueLanguage
dc.contributor.advisorไพเราะ ปิ่นพานิชการ-
dc.contributor.authorกุลนี ชูพึ่งอาตม์-
dc.contributor.otherจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. บัณฑิตวิทยาลัย-
dc.date.accessioned2020-11-23T06:08:45Z-
dc.date.available2020-11-23T06:08:45Z-
dc.date.issued2539-
dc.identifier.isbn9746343157-
dc.identifier.urihttp://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/70885-
dc.descriptionวิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2539en_US
dc.description.abstractงานวิจัยนี้ ศึกษาการทำเอนไซม์บีตา-ไซโลซีเดสจาก Streptomyces sp. 43-4 ให้บริสุทธิ์ โดยการตกตะกอนลำดับส่วนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต ที่ความเข้มข้น 40-80 เปอร์เซ็นต์ จากนั้นทำคอลัมน์ โครมาโตรกราฟีบนดีอีเออี ไบโอเจล-อกาโรส และเซฟาเด็กช์ จี-200 พบว่าได้เอนไซม์มีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 9.54 เท่า และเหลือแอคดิวิตี 9.94 เปอร์เซนต์ การทำงานของเอนไซม์ถูกยับยั้งโดย เอ็น-เอธิลมาลีอิไมด์ และสามารถคืนแอคติวิตีโดยไดไธโอธริอีทอล แต่ความสามารถในการกลับคืนมีความลัมพันธ์แบบไม่เป็นเส้นตรง เมื่อเพิ่มความเข้มข้นของเอ็น-เอธิลมาลีอิไมด์ จากการตรวจสอบสมบัติของเอนไซม์พบว่า เอนไซม์นี้ มีค่า Km ต่อพารา-ไนโตรฟินีล บีตา-ดี-ไซโลไพราโนไซด์ และ ออร์โธ-ไนโตรฟีนิล บีตา-ดี-ไซโลไพราโน- ไซด์ เท่ากับ 2.04 และ 4.54 มิลลิโมลาร์ ตามลำดับ อุณหถูมีและความเป็นกรดด่างที่เหมาะสมต่อการ ทำงานของเอนไซม์คือ 45 องคาเซลเซียส และ 6.5 ตามลำดับ เอนไซม์ถูกยับยั้งในลักษณะแข่งขันโดย ดี ไซโลส โดยมีค่า Ki เท่ากับ 180 มิลลิโมลาร์ นอกจากนี้ยังถูกยับยั้งอย่างรุนแรงด้วยอิออนของทองแดง เงิน, สังกะสี, นิเกิล และดีบุก ส่วนอิออนของเหล็ก, โคบอลท์, แมกนีเซียม, แมงกานีส และแคลเซียม มีผลเล็กน้อยในการยับยั้งแอคติวิตี เอนไซม์นี้เสถียรต่ออุณหภูมิสูงถึง 35 องศาเซลเซียสและเสถียรต่อความ เป็นกรดด่างในช่วงกว้างตั้งแต่ 5.5-8.5 จากการวิเคราะห์น้ำหนักโมเลกุลโดยวิธีเจลฟ์ลเตรชัน พบว่าเอนไซม์นี้มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 270,000 ดาลตัน และเมื่อวิเคราะห์จากโซเดียมโดเดชิลโพลิอะคริลาไมด์เจลอิเลคโตรโฟริซีส พบว่าเอนไซม์ ประกอบด้วย 4 หน่วยย่อยโดย 2 หน่วยแรก มีน้ำหนักโมเลกุล 90,000 และ 82,000 ดาลตันตามลำดับ หน่วยย่อยที่ 3 และ 4 มีน้ำหนักโมเลกุลเท่ากันคือ 54,000 ดาลตัน-
dc.description.abstractalternativeB-Xylosidase from Streptomyces sp.43-4 was purified by fractionation with 40-80% saturation of ammonium sulfate and consecutive column chromatography on DEAE Biogel-Agarose and Sephadex G-200, respectively. The specific activity of the enzyme was increased by 9.54 folds with 9.94% recovery. This enzyme was inhibited by N-ethylmaleimide and the inhibition could be reversed by dithiothreitol. However, this reversion was not in linear relationship with concentration of N-ethylmaleimide. The Km values of the enzyme for p-nitrophenyl B-D-xylopyranoside and o-nitrophenyl B-D-xylopyra- noside were 2.04 and 4.54 mM, respectively. The optimun temperature and pH for the enzyme activity were 45 c and 6.5 with acetate buffer. respectively. The activity was competitively inhibited by xylose with the Ki value of 180 mM. The same activity was dramatically inhibited by Cu 2+, Ag 2+, Zn 2+ , Ni + and Sn 2+ while Fe 2+, Co 2+ ,Mg 2+,Mn 2+ and Ca 2+ have slightly effected. The enzyme was. stable up to 35 ℃ and posses broad pH range of 5.5-8.5. The molecular weight of the purified enzyme estimated via gel filtration was 270,000 daltons. Analysis of the enzyme on sodium dodecyl polyacrylamide gel electrophoresis revealed that it composed of 4 subunits with molecular weight of 90,000 and 82,000 daltons for the first 2 subunits and 54,000 daltons for the other 2 identical subunits.-
dc.language.isothen_US
dc.publisherจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัยen_US
dc.rightsจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัยen_US
dc.subjectสเตรปโตมัยซิส-
dc.subjectStreptomyces-
dc.titleการทำให้บริสุทธิ์และสมบัติของบีตา-ไซโลซิเดส จาก Streptomyces sp.43-4en_US
dc.title.alternativePurification and properties of B-XYLOSIDASE FROM Streptomyces sp.43-4en_US
dc.typeThesisen_US
dc.degree.nameวิทยาศาสตรมหาบัณฑิตen_US
dc.degree.levelปริญญาโทen_US
dc.degree.disciplineจุลชีววิทยาen_US
dc.degree.grantorจุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัยen_US
dc.email.advisorPairoh.P@Chula.ac.th-
Appears in Collections:Grad - Theses

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Kunlanee_ch_front_p.pdf948.42 kBAdobe PDFView/Open
Kunlanee_ch_ch1_p.pdf1.88 MBAdobe PDFView/Open
Kunlanee_ch_ch2_p.pdf1.15 MBAdobe PDFView/Open
Kunlanee_ch_ch3_p.pdf2.02 MBAdobe PDFView/Open
Kunlanee_ch_ch4_p.pdf1.01 MBAdobe PDFView/Open
Kunlanee_ch_back_p.pdf1.2 MBAdobe PDFView/Open
Show simple item record


Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.