การทำให้บริสุทธิ์และสมบัติของบีตา-ไซโลซิเดส จาก Streptomyces sp.43-4

Abstract

งานวิจัยนี้ ศึกษาการทำเอนไซม์บีตา-ไซโลซีเดสจาก Streptomyces sp. 43-4 ให้บริสุทธิ์ โดยการตกตะกอนลำดับส่วนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต ที่ความเข้มข้น 40-80 เปอร์เซ็นต์ จากนั้นทำคอลัมน์ โครมาโตรกราฟีบนดีอีเออี ไบโอเจล-อกาโรส และเซฟาเด็กช์ จี-200 พบว่าได้เอนไซม์มีความบริสุทธิ์เพิ่มขึ้น 9.54 เท่า และเหลือแอคดิวิตี 9.94 เปอร์เซนต์ การทำงานของเอนไซม์ถูกยับยั้งโดย เอ็น-เอธิลมาลีอิไมด์ และสามารถคืนแอคติวิตีโดยไดไธโอธริอีทอล แต่ความสามารถในการกลับคืนมีความลัมพันธ์แบบไม่เป็นเส้นตรง เมื่อเพิ่มความเข้มข้นของเอ็น-เอธิลมาลีอิไมด์ จากการตรวจสอบสมบัติของเอนไซม์พบว่า เอนไซม์นี้ มีค่า Km ต่อพารา-ไนโตรฟินีล บีตา-ดี-ไซโลไพราโนไซด์ และ ออร์โธ-ไนโตรฟีนิล บีตา-ดี-ไซโลไพราโน- ไซด์ เท่ากับ 2.04 และ 4.54 มิลลิโมลาร์ ตามลำดับ อุณหถูมีและความเป็นกรดด่างที่เหมาะสมต่อการ ทำงานของเอนไซม์คือ 45 องคาเซลเซียส และ 6.5 ตามลำดับ เอนไซม์ถูกยับยั้งในลักษณะแข่งขันโดย ดี ไซโลส โดยมีค่า Ki เท่ากับ 180 มิลลิโมลาร์ นอกจากนี้ยังถูกยับยั้งอย่างรุนแรงด้วยอิออนของทองแดง เงิน, สังกะสี, นิเกิล และดีบุก ส่วนอิออนของเหล็ก, โคบอลท์, แมกนีเซียม, แมงกานีส และแคลเซียม มีผลเล็กน้อยในการยับยั้งแอคติวิตี เอนไซม์นี้เสถียรต่ออุณหภูมิสูงถึง 35 องศาเซลเซียสและเสถียรต่อความ เป็นกรดด่างในช่วงกว้างตั้งแต่ 5.5-8.5 จากการวิเคราะห์น้ำหนักโมเลกุลโดยวิธีเจลฟ์ลเตรชัน พบว่าเอนไซม์นี้มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 270,000 ดาลตัน และเมื่อวิเคราะห์จากโซเดียมโดเดชิลโพลิอะคริลาไมด์เจลอิเลคโตรโฟริซีส พบว่าเอนไซม์ ประกอบด้วย 4 หน่วยย่อยโดย 2 หน่วยแรก มีน้ำหนักโมเลกุล 90,000 และ 82,000 ดาลตันตามลำดับ หน่วยย่อยที่ 3 และ 4 มีน้ำหนักโมเลกุลเท่ากันคือ 54,000 ดาลตัน