การผลิตลินามาเรสจากยีสต์

Abstract

ในการคัดแยกเชื้อยีสต์ 131 สายพันธุ์ที่แยกได้จากมันสำปะหลังสดหมัก พบว่ามีแอนติวิตีของเบต้า-กลูโคซีเคส 101 สายพันธุ์ เมื่อนำยีสต์ทั้ง 101 สายพันธุ์นั้นมาตรวจสอบแอคติวิตีของลินามาเรส พบว่า มี 42 สายพันธุ์ ที่มีลินามาเรสแอคติวิตีในอาหารที่มีลินามาริน และ 12 สายพันธุ์มีลินามา เรสแอคติวิตี ในอาหารที่ไม่มีลินามาริน ผลการทดลองพบว่า เอนไซม์ลินามาเรสจากยีสต์ที่ทำการศึกษาเป็นเอนไซม์ที่อยู่ภายในเซลล์และเชื้อยีสต์สายพันธุ์ B -1-14 ผลิตลินามาเรสที่มีแอคติวิตีสูงสุด มาเลี้ยงในอาหารเหลวที่มีกลูโคส 0.05% เป็นแหล่งคาร์บอน แบคโตเปปโตน 0.5% เป็นแหล่งไนโตรเจน ผงสกัดมอลท์ 0.3% และผงสกัดยีสต์ 0.3% เป็นแหล่งของวิตามิน และโปแตสเซียมไซนาไนด์ 40 ส่วนในล้านส่วน สภาวะที่เหมาะสมในการเลี้ยงเชื้อเพื่อการผลิตลินามาเรสโดยยีสต์สายพันธุ์ B-1-14 ได้แก่ ความเป็นกรดด่างเริ่มต้นของอาหารเลี้ยงเชื้อ 6.0 โดยเลี้ยงเชื้อที่ความเร็ว 150 รอบต่อนาที ที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 48 ชั่วโมง สามารถผลิตเอนไซม์ ลินามาเรสที่มีแอตดิวิตี 3.75 หน่วยต่อกรัมเซลล์เปียก ผลการทดลองสกัดและทำให้ลินามาเรสจากยีสต์สายพันธุ์ B-1-14 บริสุทธิ์ พบว่าการตกตะกอนเอนไซม์ด้วยแอมโมเนียซัลเฟตอิ่มตัว 30-60 % ตามด้วยการผ่านคอลัมน์ดีเออี-โตโยเพิร์ล 650 เอ็ม และคอลัมน์เจลพีลเตรยัน เอชดับเบิลยู-55 จะได้เอนไซม์ที่มีความบริสุทธิ์ขึ้น 61.5 เท่า และได้ปริมาณเอนไซม์ 41.2% เอนไซม์ลินามาเรสที่ได้มีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 110,000 ดาลตัน มีค่า Km ต่อลินามาริน และ PNPG เท่ากับ 2.94 และ 0.07 มิลลิโมลาร์ ตามลำดับ สภาวะที่เหมาะสมต่อการทำงานเอนไซม์คือ อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียส ที่ความเป็นกรดด่างเท่ากับ 6.5 เอนไซม์มีความเสถียรต่ออุณหภูมิในช่วง 20-45 องศาเซลเซียส ผลการศึกษาทางอนุกรมวิธาน เพื่อจำแนกชนิดของเชื้อยีสต์ สายพันธุ์ B-1-14 พบว่ายีสต์ สายพันธุ์ B-1-14 นี่อาจจะเป็น Hansenula anomala